写出原核表达实验步骤。
写出原核表达实验步骤。
发布时间：2025-07-22 16:19:14
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答案：原核表达实验步骤如下：1）按上述步骤提取该组织的RNA，反转录为cDNA。2）以cDNA为模板，用上述引物扩增出带酶切位点的A基因片段。3）用和分别切割目的片段和载体，连接酶将A基因和载体连接起来构成重组质粒。4）将重组质粒转入感受态的大肠杆菌BL21中，涂布，根据载体所携带的抗性标记筛选出稳定遗传重组质粒的单克隆。5）摇菌、扩大培养，待菌液生长到对数生长期，收集菌体，裂解、收集蛋白质。6）将总蛋白制备成溶液通过镍柱，由于A蛋白携带有His标签，可以被吸附在镍柱上，然后加缓冲液将吸附在镍柱上的A蛋白洗脱下来，即可得到A蛋白溶液。
