试回答载体构建的方法有哪些？
试回答载体构建的方法有哪些？
发布时间：2025-08-02 00:47:56
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答案：【计分规则】: 载体构建是指按照人为设计将基因与载体（可以是克隆载体、也可以是表达载体）重组在一起的基因操作过程。经典的载体构建方法是限制性核酸内切酶切割-连接酶重组法，即根据载体多克隆位点基因序列中的酶切位点，选择基因中不存在、载体中位点唯一的限制性内切酶添加在基因序列的上下游，将经同样的酶切处理、拥有相同末端的载体片段与基因片段混合，在连接酶催化下二者重组在一起。经PCR、酶切或者序列测定筛选出重组的载体分子。除上述方法外，还可以利用T-A克隆、In-Fusion克隆法、GateWay 等方法进行载体构建。
